高速反流色譜法(hsccc)是一項(xiàng)強(qiáng)有力的分離技術(shù)，并逐漸應(yīng)用于天然產(chǎn)物化學(xué)。分析型hsccc的儀器已經(jīng)可以得到，并有在天然產(chǎn)物化學(xué)方面應(yīng)用的綜述。若干種類型的檢測(cè)器已經(jīng)被連接到分析型hsccc儀器上，其中包括uv、ir和質(zhì)譜(ms)等檢測(cè)器。這些系統(tǒng)能提供關(guān)于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)的重要信息。然而它們對(duì)于hsccc的應(yīng)用受限于儀器使用的復(fù)雜性(ms)，高噪音水平(uv)或靈敏度(ir)。
光散射作為液相色譜法的一種選擇檢測(cè)原理已被提出。蒸發(fā)激光光散射檢測(cè)法(elsd)作為一種通用檢測(cè)方法，是基于以下原理：洗脫液［例如來自一個(gè)高效液相色譜(hplc)柱］被霧化和蒸發(fā)，從而在載氣流中留下溶質(zhì)的微小粒子。這些粒子通過一激光束，使光發(fā)生散射，散射的光被檢測(cè)。其響應(yīng)的大小與通過檢測(cè)器的溶質(zhì)質(zhì)量有關(guān)。已經(jīng)證實(shí)，使用hplc分析碳水化合物和類脂時(shí)，elsd會(huì)特別有用。

1　實(shí)驗(yàn)

　　溶媒hplc級(jí)(burdick&jackson)。水通過milli-q系統(tǒng)(millipore)凈化。參比物從c.rothinc.(karlsruhe,f.r.g.)購(gòu)買�！拔⒘俊备咚俜戳魃V儀與一個(gè)30ml螺旋管和0.85mmi.d.聚四氟乙烯管從p.c.inc.(potomac,md,u.s.a.)獲得；溶媒利用miltonroy實(shí)驗(yàn)室的泵泵��；elsd系統(tǒng)從varex(burtonsville,md,u.s.a.)獲得；色譜圖被記錄在varian9176型圖記錄儀上(滿標(biāo)1mv)。

　　首先用固定相充滿hsccc螺旋管，然后開始旋轉(zhuǎn)，這時(shí)固定相被持續(xù)泵入。當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到1800r.min-1時(shí)，流動(dòng)相通過入口被引入。當(dāng)螺旋管達(dá)到平衡以后(即流出物由固定相改為流動(dòng)相時(shí))，將流速調(diào)為0.8ml.min-1。然后，將螺旋管出口與光散射檢測(cè)器相連接。當(dāng)基線變得平滑時(shí)指示溶媒已被完全蒸發(fā)。將化合物1～4(見圖1)溶解在固定相里。樣品溶液通過valco公司的六通閥和0.25ml樣品環(huán)注入(圖1，0min)。注入的量為300μg(1)，10μg(2)，35μg(3)和20μg(4)。反壓低于1378.95kpa，運(yùn)行后固定相保留90%。檢測(cè)器預(yù)熱20min；時(shí)間恒量為1s。將檢測(cè)器的隨意流動(dòng)設(shè)為8，形成一個(gè)反壓為220.6kpa的氮載氣流。

2　結(jié)果和討論

　　hsccc完成的標(biāo)準(zhǔn)化合物1～4的混合物的分離，這種分離由溶媒系統(tǒng)氯仿—甲醇—水(13∶7∶8)下層作為流動(dòng)相完成。流速為0.8ml.min-1。螺旋管流出物被直接引入elsd系統(tǒng)的噴霧室內(nèi)。噴霧室和排氣管的溫度被分別設(shè)定為110℃和80℃。設(shè)定相對(duì)高的溫度是為了蒸發(fā)流動(dòng)相中的少量水份，并使非保留固定相(含水的)盡可能微滴化。含水固定相遺留下來不會(huì)影響色譜。對(duì)于2～4化合物(熔點(diǎn)超過200℃)每種化合物每次注射10～35μg時(shí)，可以得到很好的檢測(cè)響應(yīng)。而化合物1即使每次注射大于100μg，也僅可給出相對(duì)微弱的檢測(cè)信號(hào)。對(duì)此可能的解釋為：熔點(diǎn)為117℃的7-甲氧基香豆素(1)以液狀微滴通過檢測(cè)器光束，由此導(dǎo)致激光光線不能有效地散射。當(dāng)同一樣品混合物被分離時(shí)，其信噪比優(yōu)于光電二極管檢測(cè)器。

　　elsd是一種靈敏而非專一性的質(zhì)量檢測(cè)方法，其檢測(cè)限大于毫微克數(shù)量級(jí)。然而，如果物質(zhì)的熔點(diǎn)等于或小于噴霧室溫度，則可能難以檢測(cè)。正如這里應(yīng)用的例子。這一點(diǎn)對(duì)于一個(gè)復(fù)雜的樣品，象分析植物提取物時(shí)則必須考慮。由于elsd是一個(gè)非破壞技術(shù)，為了在制備型hsccc使用這個(gè)檢測(cè)方法，可以在洗脫線上裝置一個(gè)流量分離管。由于固定相的殘留而引起檢測(cè)噪音，典型的象uv檢測(cè)器，則被完全消除了。我們的初步結(jié)果顯示，對(duì)分析型hsccc來說，elsd是一種理想的、易使用的檢測(cè)手段。進(jìn)一步對(duì)于無(wú)紫外線吸收化合物和高紫外切斷的溶媒的評(píng)價(jià)，目前正在我們實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行中。

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