高效快速準(zhǔn)確生物傳感器技術(shù)成功分離赤芍抗內(nèi)毒素成分
發(fā)布時(shí)間:2008/5/29 0:00:00 訪問次數(shù):489
近日，重慶第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室的科研人員，采用生物傳感器技術(shù)，成功地從赤芍中分離出抗內(nèi)毒素成分。研究人員認(rèn)為這種方法具有高效、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模地從中草藥中分離抗內(nèi)毒素的單體成分。
赤芍為毛茛科植物芍藥或川赤芍的干燥根，具有清熱解毒、涼血化瘀等功能。而最近的研究表明，赤芍還具有很強(qiáng)的抗內(nèi)毒素作用，尤其是赤芍的精制提取物可以直接破壞內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)。但是，至今為止，人們對(duì)赤芍抗內(nèi)毒素作用的物質(zhì)基礎(chǔ)仍不清楚，從而大大制約了其臨床應(yīng)用。因此，從赤芍中分離出具有抗內(nèi)毒素作用的單體化合物再進(jìn)行相關(guān)藥學(xué)研究，對(duì)于擴(kuò)大其臨床用途，如用于膿毒癥的防治等具有重要的理論意義。
生物傳感器技術(shù)是研究生物分子之間相互作用及親合力的一種新方法。它主要是利用光學(xué)共振鏡原理，在生物傳感器樣品池的表面包被固定配基，當(dāng)配基與其配體結(jié)合時(shí)，以共振角度進(jìn)入光線衰減區(qū)的激光就會(huì)發(fā)生共振角度(折光系數(shù))的改變，這一變化通過計(jì)算機(jī)處理后就可以表示傳感器表面配基與其配體分子之間的相互作用及親合力。當(dāng)配體濃度固定時(shí)，通過配基與配體的結(jié)合反應(yīng)曲線的變化可間接反映配體(即不同物質(zhì))與固定的配基之間親合力的大小。生物傳感器技術(shù)具有實(shí)時(shí)、快速、高效、準(zhǔn)確、客觀等特點(diǎn)，試驗(yàn)結(jié)果受人為因素影響較小。
由于赤芍的組成成分復(fù)雜，為了能有效地分離赤芍抗內(nèi)毒素單體，科研人員在研究中試用了光學(xué)生物傳感器技術(shù)，將內(nèi)毒素的有效成分脂多糖(lps)的活性中心類脂a(lipida)包被于生物傳感器疏水樣品池中，使lipida結(jié)構(gòu)中具有重要生物學(xué)作用的陰離子基團(tuán)外露，并以此為篩選、分離和檢測赤芍抗內(nèi)毒素單體的靶點(diǎn)，通過與lipida結(jié)合反應(yīng)的比較，追蹤并分離出具有拮抗內(nèi)毒素作用的單體成分。
lipida是lps的生物活性中心，與lipida發(fā)生結(jié)合作用是中和lps的關(guān)鍵。將配基lipida包被于生物傳感器樣品池表面，優(yōu)選與其結(jié)合的配基，以lipida為篩選分離靶點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)單一、定向篩選功能。此外，通過測定樣品與lipida的結(jié)合反應(yīng)，可以直觀地反映出樣品與lipida的結(jié)合活性，間接地反映出樣品的內(nèi)毒素中和能力，從而排除了其他化合物成分對(duì)分離、判定所測成分抗內(nèi)毒素作用的影響。
生物傳感器還具有微量樣品回吸收功能，通過選擇適當(dāng)?shù)南疵摋l件，即可得到純度極高的配體分子，從而再進(jìn)行進(jìn)一步的電泳、紫外掃描等研究�？蒲腥藛T將lipida包被于樣品池表面，選取可與其結(jié)合的物質(zhì)，以0.01摩爾/升的鹽酸做為特異性洗脫液，回收到與lipida結(jié)合性較強(qiáng)的微量物質(zhì)。科研人員指出，雖然可與lipida發(fā)生結(jié)合的成分不只一種，但是通過特異性的梯度洗脫，便可能得到純度較高、結(jié)合力較強(qiáng)的組分。通過對(duì)回收物再次進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)測定和紫外掃描，可得到對(duì)所需物質(zhì)的初步認(rèn)識(shí)，為下一步的硅膠柱層析和hplc分離提供參考，避免傳統(tǒng)中草藥在分離時(shí)的盲目性。
利用生物傳感器跟蹤測定分離組分與生物傳感器樣品池表面反應(yīng)得到的結(jié)果，再通過hplc法，科研人員從赤芍水煎液中分離出了單體成分1，2，3，4，6－o－五沒食子酰－(－d－葡萄糖(pgg)。pgg對(duì)lps的個(gè)體中和試驗(yàn)測定結(jié)果顯示，pgg能夠呈劑量依賴性地抑制lps催化的鱟試劑凝集反應(yīng)，pgg在8、4、2微克/毫升濃度時(shí)能夠分別中和lps68.8%、43.7%、31.4%的活性，表明其具有較強(qiáng)的內(nèi)毒素中和作用。另外也說明pgg與內(nèi)毒素的中和作用同時(shí)表現(xiàn)為兩者的結(jié)合作用。
通過以上實(shí)驗(yàn)，研究人員認(rèn)為應(yīng)用生物傳感器技術(shù)分離中草藥中抗內(nèi)毒素單體化合物的方法是切實(shí)可行的。與傳統(tǒng)的鱟試劑法測定內(nèi)毒素中和作用相比，生物傳感器技術(shù)具有操作快速、干擾因素小、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模地從中草藥中分離抗內(nèi)毒素的單體成分。
赤芍為毛茛科植物芍藥或川赤芍的干燥根，具有清熱解毒、涼血化瘀等功能。而最近的研究表明，赤芍還具有很強(qiáng)的抗內(nèi)毒素作用，尤其是赤芍的精制提取物可以直接破壞內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)。但是，至今為止，人們對(duì)赤芍抗內(nèi)毒素作用的物質(zhì)基礎(chǔ)仍不清楚，從而大大制約了其臨床應(yīng)用。因此，從赤芍中分離出具有抗內(nèi)毒素作用的單體化合物再進(jìn)行相關(guān)藥學(xué)研究，對(duì)于擴(kuò)大其臨床用途，如用于膿毒癥的防治等具有重要的理論意義。
生物傳感器技術(shù)是研究生物分子之間相互作用及親合力的一種新方法。它主要是利用光學(xué)共振鏡原理，在生物傳感器樣品池的表面包被固定配基，當(dāng)配基與其配體結(jié)合時(shí)，以共振角度進(jìn)入光線衰減區(qū)的激光就會(huì)發(fā)生共振角度(折光系數(shù))的改變，這一變化通過計(jì)算機(jī)處理后就可以表示傳感器表面配基與其配體分子之間的相互作用及親合力。當(dāng)配體濃度固定時(shí)，通過配基與配體的結(jié)合反應(yīng)曲線的變化可間接反映配體(即不同物質(zhì))與固定的配基之間親合力的大小。生物傳感器技術(shù)具有實(shí)時(shí)、快速、高效、準(zhǔn)確、客觀等特點(diǎn)，試驗(yàn)結(jié)果受人為因素影響較小。
由于赤芍的組成成分復(fù)雜，為了能有效地分離赤芍抗內(nèi)毒素單體，科研人員在研究中試用了光學(xué)生物傳感器技術(shù)，將內(nèi)毒素的有效成分脂多糖(lps)的活性中心類脂a(lipida)包被于生物傳感器疏水樣品池中，使lipida結(jié)構(gòu)中具有重要生物學(xué)作用的陰離子基團(tuán)外露，并以此為篩選、分離和檢測赤芍抗內(nèi)毒素單體的靶點(diǎn)，通過與lipida結(jié)合反應(yīng)的比較，追蹤并分離出具有拮抗內(nèi)毒素作用的單體成分。
lipida是lps的生物活性中心，與lipida發(fā)生結(jié)合作用是中和lps的關(guān)鍵。將配基lipida包被于生物傳感器樣品池表面，優(yōu)選與其結(jié)合的配基，以lipida為篩選分離靶點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)單一、定向篩選功能。此外，通過測定樣品與lipida的結(jié)合反應(yīng)，可以直觀地反映出樣品與lipida的結(jié)合活性，間接地反映出樣品的內(nèi)毒素中和能力，從而排除了其他化合物成分對(duì)分離、判定所測成分抗內(nèi)毒素作用的影響。
生物傳感器還具有微量樣品回吸收功能，通過選擇適當(dāng)?shù)南疵摋l件，即可得到純度極高的配體分子，從而再進(jìn)行進(jìn)一步的電泳、紫外掃描等研究�？蒲腥藛T將lipida包被于樣品池表面，選取可與其結(jié)合的物質(zhì)，以0.01摩爾/升的鹽酸做為特異性洗脫液，回收到與lipida結(jié)合性較強(qiáng)的微量物質(zhì)。科研人員指出，雖然可與lipida發(fā)生結(jié)合的成分不只一種，但是通過特異性的梯度洗脫，便可能得到純度較高、結(jié)合力較強(qiáng)的組分。通過對(duì)回收物再次進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)測定和紫外掃描，可得到對(duì)所需物質(zhì)的初步認(rèn)識(shí)，為下一步的硅膠柱層析和hplc分離提供參考，避免傳統(tǒng)中草藥在分離時(shí)的盲目性。
利用生物傳感器跟蹤測定分離組分與生物傳感器樣品池表面反應(yīng)得到的結(jié)果，再通過hplc法，科研人員從赤芍水煎液中分離出了單體成分1，2，3，4，6－o－五沒食子酰－(－d－葡萄糖(pgg)。pgg對(duì)lps的個(gè)體中和試驗(yàn)測定結(jié)果顯示，pgg能夠呈劑量依賴性地抑制lps催化的鱟試劑凝集反應(yīng)，pgg在8、4、2微克/毫升濃度時(shí)能夠分別中和lps68.8%、43.7%、31.4%的活性，表明其具有較強(qiáng)的內(nèi)毒素中和作用。另外也說明pgg與內(nèi)毒素的中和作用同時(shí)表現(xiàn)為兩者的結(jié)合作用。
通過以上實(shí)驗(yàn)，研究人員認(rèn)為應(yīng)用生物傳感器技術(shù)分離中草藥中抗內(nèi)毒素單體化合物的方法是切實(shí)可行的。與傳統(tǒng)的鱟試劑法測定內(nèi)毒素中和作用相比，生物傳感器技術(shù)具有操作快速、干擾因素小、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模地從中草藥中分離抗內(nèi)毒素的單體成分。
近日，重慶第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室的科研人員，采用生物傳感器技術(shù)，成功地從赤芍中分離出抗內(nèi)毒素成分。研究人員認(rèn)為這種方法具有高效、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模地從中草藥中分離抗內(nèi)毒素的單體成分。
赤芍為毛茛科植物芍藥或川赤芍的干燥根，具有清熱解毒、涼血化瘀等功能。而最近的研究表明，赤芍還具有很強(qiáng)的抗內(nèi)毒素作用，尤其是赤芍的精制提取物可以直接破壞內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)。但是，至今為止，人們對(duì)赤芍抗內(nèi)毒素作用的物質(zhì)基礎(chǔ)仍不清楚，從而大大制約了其臨床應(yīng)用。因此，從赤芍中分離出具有抗內(nèi)毒素作用的單體化合物再進(jìn)行相關(guān)藥學(xué)研究，對(duì)于擴(kuò)大其臨床用途，如用于膿毒癥的防治等具有重要的理論意義。
生物傳感器技術(shù)是研究生物分子之間相互作用及親合力的一種新方法。它主要是利用光學(xué)共振鏡原理，在生物傳感器樣品池的表面包被固定配基，當(dāng)配基與其配體結(jié)合時(shí)，以共振角度進(jìn)入光線衰減區(qū)的激光就會(huì)發(fā)生共振角度(折光系數(shù))的改變，這一變化通過計(jì)算機(jī)處理后就可以表示傳感器表面配基與其配體分子之間的相互作用及親合力。當(dāng)配體濃度固定時(shí)，通過配基與配體的結(jié)合反應(yīng)曲線的變化可間接反映配體(即不同物質(zhì))與固定的配基之間親合力的大小。生物傳感器技術(shù)具有實(shí)時(shí)、快速、高效、準(zhǔn)確、客觀等特點(diǎn)，試驗(yàn)結(jié)果受人為因素影響較小。
由于赤芍的組成成分復(fù)雜，為了能有效地分離赤芍抗內(nèi)毒素單體，科研人員在研究中試用了光學(xué)生物傳感器技術(shù)，將內(nèi)毒素的有效成分脂多糖(lps)的活性中心類脂a(lipida)包被于生物傳感器疏水樣品池中，使lipida結(jié)構(gòu)中具有重要生物學(xué)作用的陰離子基團(tuán)外露，并以此為篩選、分離和檢測赤芍抗內(nèi)毒素單體的靶點(diǎn)，通過與lipida結(jié)合反應(yīng)的比較，追蹤并分離出具有拮抗內(nèi)毒素作用的單體成分。
lipida是lps的生物活性中心，與lipida發(fā)生結(jié)合作用是中和lps的關(guān)鍵。將配基lipida包被于生物傳感器樣品池表面，優(yōu)選與其結(jié)合的配基，以lipida為篩選分離靶點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)單一、定向篩選功能。此外，通過測定樣品與lipida的結(jié)合反應(yīng)，可以直觀地反映出樣品與lipida的結(jié)合活性，間接地反映出樣品的內(nèi)毒素中和能力，從而排除了其他化合物成分對(duì)分離、判定所測成分抗內(nèi)毒素作用的影響。
生物傳感器還具有微量樣品回吸收功能，通過選擇適當(dāng)?shù)南疵摋l件，即可得到純度極高的配體分子，從而再進(jìn)行進(jìn)一步的電泳、紫外掃描等研究。科研人員將lipida包被于樣品池表面，選取可與其結(jié)合的物質(zhì)，以0.01摩爾/升的鹽酸做為特異性洗脫液，回收到與lipida結(jié)合性較強(qiáng)的微量物質(zhì)。科研人員指出，雖然可與lipida發(fā)生結(jié)合的成分不只一種，但是通過特異性的梯度洗脫，便可能得到純度較高、結(jié)合力較強(qiáng)的組分。通過對(duì)回收物再次進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)測定和紫外掃描，可得到對(duì)所需物質(zhì)的初步認(rèn)識(shí)，為下一步的硅膠柱層析和hplc分離提供參考，避免傳統(tǒng)中草藥在分離時(shí)的盲目性。
利用生物傳感器跟蹤測定分離組分與生物傳感器樣品池表面反應(yīng)得到的結(jié)果，再通過hplc法，科研人員從赤芍水煎液中分離出了單體成分1，2，3，4，6－o－五沒食子酰－(－d－葡萄糖(pgg)。pgg對(duì)lps的個(gè)體中和試驗(yàn)測定結(jié)果顯示，pgg能夠呈劑量依賴性地抑制lps催化的鱟試劑凝集反應(yīng)，pgg在8、4、2微克/毫升濃度時(shí)能夠分別中和lps68.8%、43.7%、31.4%的活性，表明其具有較強(qiáng)的內(nèi)毒素中和作用。另外也說明pgg與內(nèi)毒素的中和作用同時(shí)表現(xiàn)為兩者的結(jié)合作用。
通過以上實(shí)驗(yàn)，研究人員認(rèn)為應(yīng)用生物傳感器技術(shù)分離中草藥中抗內(nèi)毒素單體化合物的方法是切實(shí)可行的。與傳統(tǒng)的鱟試劑法測定內(nèi)毒素中和作用相比，生物傳感器技術(shù)具有操作快速、干擾因素小、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模地從中草藥中分離抗內(nèi)毒素的單體成分。
赤芍為毛茛科植物芍藥或川赤芍的干燥根，具有清熱解毒、涼血化瘀等功能。而最近的研究表明，赤芍還具有很強(qiáng)的抗內(nèi)毒素作用，尤其是赤芍的精制提取物可以直接破壞內(nèi)毒素的結(jié)構(gòu)。但是，至今為止，人們對(duì)赤芍抗內(nèi)毒素作用的物質(zhì)基礎(chǔ)仍不清楚，從而大大制約了其臨床應(yīng)用。因此，從赤芍中分離出具有抗內(nèi)毒素作用的單體化合物再進(jìn)行相關(guān)藥學(xué)研究，對(duì)于擴(kuò)大其臨床用途，如用于膿毒癥的防治等具有重要的理論意義。
生物傳感器技術(shù)是研究生物分子之間相互作用及親合力的一種新方法。它主要是利用光學(xué)共振鏡原理，在生物傳感器樣品池的表面包被固定配基，當(dāng)配基與其配體結(jié)合時(shí)，以共振角度進(jìn)入光線衰減區(qū)的激光就會(huì)發(fā)生共振角度(折光系數(shù))的改變，這一變化通過計(jì)算機(jī)處理后就可以表示傳感器表面配基與其配體分子之間的相互作用及親合力。當(dāng)配體濃度固定時(shí)，通過配基與配體的結(jié)合反應(yīng)曲線的變化可間接反映配體(即不同物質(zhì))與固定的配基之間親合力的大小。生物傳感器技術(shù)具有實(shí)時(shí)、快速、高效、準(zhǔn)確、客觀等特點(diǎn)，試驗(yàn)結(jié)果受人為因素影響較小。
由于赤芍的組成成分復(fù)雜，為了能有效地分離赤芍抗內(nèi)毒素單體，科研人員在研究中試用了光學(xué)生物傳感器技術(shù)，將內(nèi)毒素的有效成分脂多糖(lps)的活性中心類脂a(lipida)包被于生物傳感器疏水樣品池中，使lipida結(jié)構(gòu)中具有重要生物學(xué)作用的陰離子基團(tuán)外露，并以此為篩選、分離和檢測赤芍抗內(nèi)毒素單體的靶點(diǎn)，通過與lipida結(jié)合反應(yīng)的比較，追蹤并分離出具有拮抗內(nèi)毒素作用的單體成分。
lipida是lps的生物活性中心，與lipida發(fā)生結(jié)合作用是中和lps的關(guān)鍵。將配基lipida包被于生物傳感器樣品池表面，優(yōu)選與其結(jié)合的配基，以lipida為篩選分離靶點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)單一、定向篩選功能。此外，通過測定樣品與lipida的結(jié)合反應(yīng)，可以直觀地反映出樣品與lipida的結(jié)合活性，間接地反映出樣品的內(nèi)毒素中和能力，從而排除了其他化合物成分對(duì)分離、判定所測成分抗內(nèi)毒素作用的影響。
生物傳感器還具有微量樣品回吸收功能，通過選擇適當(dāng)?shù)南疵摋l件，即可得到純度極高的配體分子，從而再進(jìn)行進(jìn)一步的電泳、紫外掃描等研究。科研人員將lipida包被于樣品池表面，選取可與其結(jié)合的物質(zhì)，以0.01摩爾/升的鹽酸做為特異性洗脫液，回收到與lipida結(jié)合性較強(qiáng)的微量物質(zhì)。科研人員指出，雖然可與lipida發(fā)生結(jié)合的成分不只一種，但是通過特異性的梯度洗脫，便可能得到純度較高、結(jié)合力較強(qiáng)的組分。通過對(duì)回收物再次進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)測定和紫外掃描，可得到對(duì)所需物質(zhì)的初步認(rèn)識(shí)，為下一步的硅膠柱層析和hplc分離提供參考，避免傳統(tǒng)中草藥在分離時(shí)的盲目性。
利用生物傳感器跟蹤測定分離組分與生物傳感器樣品池表面反應(yīng)得到的結(jié)果，再通過hplc法，科研人員從赤芍水煎液中分離出了單體成分1，2，3，4，6－o－五沒食子酰－(－d－葡萄糖(pgg)。pgg對(duì)lps的個(gè)體中和試驗(yàn)測定結(jié)果顯示，pgg能夠呈劑量依賴性地抑制lps催化的鱟試劑凝集反應(yīng)，pgg在8、4、2微克/毫升濃度時(shí)能夠分別中和lps68.8%、43.7%、31.4%的活性，表明其具有較強(qiáng)的內(nèi)毒素中和作用。另外也說明pgg與內(nèi)毒素的中和作用同時(shí)表現(xiàn)為兩者的結(jié)合作用。
通過以上實(shí)驗(yàn)，研究人員認(rèn)為應(yīng)用生物傳感器技術(shù)分離中草藥中抗內(nèi)毒素單體化合物的方法是切實(shí)可行的。與傳統(tǒng)的鱟試劑法測定內(nèi)毒素中和作用相比，生物傳感器技術(shù)具有操作快速、干擾因素小、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適合于大規(guī)模地從中草藥中分離抗內(nèi)毒素的單體成分。
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